Белок мочи (протеинурия). Определение белка в моче

Р-вы 50% р-р азотной к-ты или р-в ларионовой. Ход определения: в штатив ставят ряд пробирак и наливают по 1 мл р-ра азотной к-ты доб-ть 1 мл мочи наслаивают на реактив и засекают время, при появлении кольца записываем время появления кольца. Если кольцо широкое делают разведение мочи.

4.Определение концентрации белка в моче с 3% сульфосалициловой кислотой.

Р-вы: 3% сск, хлорид натрия 9%, ст р-р альбумина 10%.Ход определения: В две мерные центрифужные пробирки «О» – опыт и «К» - контроль помещают по 1,25мл прозрачной мочи. В опытную прибавляют 3,75мл 3% раствора сульфосалициловой кислоты, в контрольную 3,75мл 0,9% раст-вора хлорида натрия. Оставляют на 5 мин., а затем фотометрируют на ФЭКе при длине во-лны 590 – 650нм (оранжевый или красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 5мм опыт против контроля. Расчет ведут по калиб-ровочному графику ил таблице. Принцип метода основан на том, что белок с сульфосалици-ловой кислотой дает помутне-ние, интенсивность которого прямо пропорционально концентрации белка.

5.обнаружение глюкозы в моче проба Гайнеса-Акимова. Принцип : Глюкоза при нагревании в щелочной среде восстанавливает дигидроксид меди (желтого цвета) в моногидроксид меди (оранжево-красного цвета).Приготовление реактива : 1) 13,3 г хим. чистого кристаллического сульфата меди(СиSO 4 . 5 Н 2 О) раствор. в 400мл воды. 2) 50г едкого натра растворяют в 400мл воды. 3) 15г чистого глицерина разводят в 200мл воды. Смешивают первый и второй растворы и тотчас приливают третий. Реактив стоек. Ход определения : В пробирку вносят 1 каплю мочи и 9 капель реактива и кипятят на водяной бане 1-2 мин. Положительная проба : желтая или оранжевая окраска жидкости или осадка.

6. Качественное определение глюкозы в моче глюкооксидазным методом. Принцип метода : глюкоза окисляется в присутствии глюкозооксидазы, согласно реакции: Глюкоза + О 2 гликонолантом + Н 2 О 2 .Образующаяся перекись Н под действием перексидазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта.

Приливаем и инкубируем 15 минут при 37 0 С. Смотреть на КФК, кювета 5мм.

Затем производят расчёты по формуле: С оп = Ext оп . Cст/ Ect cт.

7.Обнаружение кетоновых тел в моче пробой Лестраде. На предметное стекло наносят (на кончике скальпеля) порошка или таблетку р-ра Лестраде, а на него 2-3 капли мочи. При наличии кетоновых тел появится окраска от розового до фиолетового. Пробу оценивают на белом фоне.

8.Обнаружение кровяного пигмента в моче пробой с 5 % спиртовым раствором амидопирина.

1.5% спиртовой р-р амидопирина(0,5 г амидопирина растворяют в 10 мл спирта 96%)2.3% р-р перекиси водорода 1,5 г гидропирита растворяют в 50 мл воды)Ход методики:в пробирку наливают 2-3 мл уксусно-эфирной вытяжки или взболтанной не фильтрованной мочи.добавляют 8-10 капель 5 % р-ра амидопирина и 8-10 капель 3% р-ра перекиси водорода;учитывают результат не позднее 2-3 мин.Проба считается положительной при наличии серо-фиолетового окрашивания.

Обнаружение уробилина в моче пробой Нейбауэра.

Основана на цветной реакции уробилиногена с реактивом Эрлиха,который сост.из 2 г парадиметиламинобенальдегида и 100 мл р-ра хлористоводородной к-ты(200 г.л).Ход определения.К нескольким мл свежевыделенной мочи приливают несколько капель р-ра Эрлиха(на 1 мл мочи и на 1 мл р-ра.Появление красного цв.в первые 30 с указывает на повыш.сод.уробилиногена.В норме окраска появляется позже или вообще отсут.При стоянии мочи уробилиноген превращается в уробилин и проба может быть ложноотрицательной.Пробу нельзя нагревать,т.к можно могут образоваться побочные комплексные соед,альдегида с порфиринами,индолом и лек.препаратами.

Обнаружение билирубина в моче пробой Розина.

Спиртовой р-р йода(10г.л):1 г кристаллического йода растворяют в цилиндре вместимостью 100 мл в 20-30 мл 96 гр.спирта-ректификата,а затем доб.доливают спиртом до метки.Ход определения.В хим.пробирку наливают 4-5 мл исследуемой мочи и осторожно наслаивают на нее спиртовой р-р йода(если моча имеет низкую относительную плотность,то следует наслаивать ее на спиртовой р-р йода).При наличии билирубина на границе между жидкостями обр.зелёное кольцо(при приёме антипирина,а также при сод.в моче кровяного пигмента проба оказывается положительной).У здорового человека эта проба отрицательна.

Исследование мочи методом сухой химии (моно- политестами).

Принцип. Метод основан на воздействии, оказываемом белком на цвет индикатора, находящегося в буферном растворе, в результате чего краситель изменяет цвет с желтого на синий.

При проведении реакции на присутствие белка в моче и определении pH с помощью индикаторной бумаги рекомендуется выполнить следующие указания:

1. Собрать мочу в тщательно вымытую посуду.
2. Использовать свежесобранную, не содержащую консервантов мочу.
3. Тщательно закрыть пенал после извлечения из него необходимого количества индикаторных полосок бумаги.
4. Не захватывать пальцами индикаторные зоны.
5. Использовать только в пределах указанного на этикетке срока годности.
6. Соблюдать правила хранения индикаторной бумаги.
7. Проводить оценку результатов в соответствии с указаниями, имеющимеся в инструкции.

Выполнение анализа мочи на анализаторе сухой химии мочи.

Ход определения. Из пенала извлекают полоску индикаторной бумаги и погружают ее в исследуемую мочу так, чтобы одновременно смочить обе индикаторные зоны. Через 2-3 с полоску помещают на белую стеклянную пластинку. Немедленно проводят оценку pH, пользуясь цветной шкалой, нанесенной на пенале. Значение pH на цветной шкале соответствуют 6,0 (или меньше); 7,0; 8,0; 9,0.

Подготовка мочи, приготовление препаратов из осадка мочи микроскопического исследования ориентировочным способом.

Микроскопическое исследование осадка мочи проводят ориентировочным методом при общем анализе и количественным подсчетом форменных элементов для более точной оценки степени луйкоцитурии и гематурии.

Правила подготовки осадка мочи для микроскопирования.

Микроскопическому исследованию подлежит первая утренняя порция мочи.

После предварительного перемешивания берут 10 мл мочи, центрифугируют 10 мин при 1500 об/мин.

Затем центрифужную пробирку с мочой резким движением опрокидывают, быстро сливают надосадочную жидкость в пустую банку.

Перемешивают, каплю помещают на предметное стекло и осторожно прикрывают покровным.

Если осадок состоит из нескольких слоев, то готовят препарат, а затем вновь центрифугируют и готовят препараты из каждого слоя в отдельности.

При отсутствии видимого на глаз осадка каплю мочи наносят на предметное стекло и мокроскопируют.

В начале материал рассматривают при малом увеличении (окуляр 7-10, обьектив 8), конденсор при этом опускают, несколько суживают диафрагму, затем препарат детально изучают при большом увеличении (окуляр 10,7 ; обьектив 40).

14.Количественное исследование осадка мочи по Нечипоренко.

Метод используется при скрытых вялотекущих воспалительных процессах (пиелонефрит, гломерулонефрит), скрытая пиурия. Для исследования патологического процесса в динамике. Для оценки эффективности проводимого лечения. Достоинства метода: технически прост, не требует большого кол-ва мочи и длитель. его хранения, применяется в амбулаторной практике. Обяз. условия : утренняя моча, средняя порция, кислая р-ция (в щелочной может быть частичный расспад клеточных элементов). 1. Перемешивают мочу.2.В мерную центрифужную пробирку помещают 10 мл мочи и центрифугируют 10 мин 1500 об/мин. 3. После центриф. отсасыв. Пипеткой верхнюю часть жидкости, оставл. ровно 1 мл осадка. 4.Осадок тщательно перемешивают и заполняют камеру Горяева. 5. Через 3-5 мин после заполн, приступают к подсчёту форменных элементов. 6.Подсчёт лейкоцитов,Er, цилиндров с окуляром 15 объективом 8 при опущ. конденсоре, в 100 больших квадратах камеры. Считают отдельно лейкоциты, Er, цилиндры (счит. не менее 4 камер Горяева) выводят сред. ариф. Х=А х 0,25х 10 6 /л. Норма: лейк. 2-4х 10 6 /л, Er до 1 х 10 6 /л, цилиндров до 0,02 х 10 6 /л (один на 4 камеры). У детей: лейк. до 2-4х 10 6 /л, Er до 0,75 х 10 6 /л, цилиндров до 0,02 х 10 6 /л.

15. Исследование мочи по Зимницкому

Этой пробой устанавливают способность почек концентр. и разводить мочу. Сущность пробы закл. в динамическом определении относительной плотности и кол-ва мочи в трёхчасыв порциях в течение суток. Проведение пробы: после опорожнения мочевого пузыря в 6 часов утра в унитаз, пациент через каждые три часа собирает мочу в отдельные банки в течение суток. Всего 8 порций. Ход исслед.: 1. Доставл. Мочу расставляют по часам и в каждой порции определяют кол-во и относительную плотность. 2. Сравнивают суточное кол-во мочи и кол-во выпитой жидкости, чтобы опред. % её выведения. 3. Вычисляют дневной и ночной диурез, суммируют, получают суточный диурез. 4. Устанавливают диапазон колебаний кол-ва и относительн. плотности мочи за сутки т.е. какова разница между самой малой порцией и большой. Показ. пробы у здор. людей: 1. Суточный диурез 800-1500 мл. 2. Дневной диурез значительно преобладает над ночным. 3.Колебания объёма мочи в отдельных порциях значительные (от 50 до 400 мл). 4. Колебания р от 1,003 до 1,028, должно быть более 0,008. При функ. недостаточности почек: гипостенурия, гипоизостенурия, изостенурия, гиперстенурия, олигурия, анурия, никтурия.

16. Описание общих свойств кала.

В норме кал состоит из продуктов секреции и экскреции пищеварит тракта, остатков неперевар или частично перевар пищевых продуктов, микробной флоры. Количество кала 100-150 г. Консистенция-плотная. Форма-цилиндрическая. Запах-каловый обычный. Цвет-коричневый. Р-ция- нейтральная, слабощелочная или слабокислая (рН 6,5-7,0-7,5). Слизь-отсутствует. Кровь-отсутствует. Остатки непереваренной пищи-отсутствует.

В норме белок выводится с мочой в незначительном количестве (20–150 мг/сутки), такие концентрации находятся за пределами чувствительности общепринятых рутинных методов, поэтому в моче здорового человека белок, как правило, не обнаруживается. Протеинурия считается установленной, если выделение белка превышает 300 мг/сутки.

Различают физиологическую и патологическую протеинурию. При физиологической (функциональной) протеинурии повышенное выделение белка с мочой может быть обусловлено некоторыми заболеваниями и определенными физиологическими состояниями. Содержание белка в моче у пациентов нормализуется после устранения причин такой протеинурии, к которым относят физическую нагрузку, стресс, гипертермию, охлаждение, застойную сердечную недостаточность, беременность.

Патологическая протеинурия не всегда связана с заболеваниями почек, различают преренальную, ренальную и постренальную формы (Табл.).

Преренальная протеинурия возникает вследствие поступления в мочу через неповрежденный почечный фильтр циркулирующих в крови в относительно высокой концентрации патологических белков с низкой ММ. Увеличение концентрации таких белков в крови наблюдается при повышенном синтезе легких цепей иммуноглобулинов, внутрисосудистом гемолизе, разрушении тканей.

Ренальная протеинурия обусловлена поражением клубочков и/или канальцев почек.

Гломерулярная (клубочковая) протеинурия развивается вследствие повреждения клубочкового фильтра, в результате нарушается фильтрация и диффузия в клубочках. В зависимости от степени нарушения функции клубочков различают селективную и неселективную протеинурии, при последней в моче наряду с низкомолекулярными появляются практически все высокомолекулярные белки.

При тубулярной (канальцевой) протеинурии в моче возрастает количество низкомолекулярных белков из-за нарушения механизмов их реабсорбции в проксимальных канальцах. Характерным является выведение с мочой белков низкой ММ (менее 40 КДа). Помимо острых и хронических заболеваний почек, эта форма встречается при отравлении тяжелыми металлами, токсическими соединениями, приеме нефротоксических препаратов. Основным маркером развития тубулярной протеинурии является повышенное содержание в моче β2-микроглобулина

Постренальная протеинурия проявляется при наличии воспалительных процессов в мочевыводящих путях и половых органах (при циститах, пиелитах, простатитах, уретритах, вульвовагинитах) или при злокачественных процессах с той же локализацией. Данный тип протеинурии диагностируется с помощью микроскопических методов, позволяющих выявить в моче опухолевые или воспалительные клетки.

Определение концентрации белка в моче представляет определенные трудности: неоднородный состав белков диктует необходимость выбора метода, позволяющего одновременно определять все белки мочи. Определение общего белка является некоторым компромиссом, так как пока не существует метода, который позволил быопределить весь спектр уропротеинов, в состав которого могут входить различные белки сыворотки крови и тканей. В настоящее время для лабораторной диагностики протеинурии используют качественные, полуколичественные и количественные методы.

Показания к исследованию

• Скрининг поражения почек (после трансплантации почки, при гломерулонефрите, пиелонефрите и др.);
• артериальная гипертензия;
• отравление тяжелыми металлами, нефротоксичными препаратами;
• системные заболевания (цирроз, саркоидоз и др.);
• инфекционные заболевания;
• беременность.

Метод исследования:

Качественные методы для обнаружения белка в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. К качественным методам определения белка в моче относятся: кольцевая проба Геллера, проба с 15–20% сульфосалициловой кислотой, проба с кипячением. Методы качественного определения белка в моче не позволяет получать надежные и воспроизводимые результаты.

Полуколичественные методы в настоящее время реализованы преимущественно методами сухой химии в форме диагностических полосок (тест-полосок) с оценкой результата визуально или с помощью анализаторов мочи. Для полуколичественного определения белка в моче в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий, обладающий большей чувствительностью по отношению к альбумину по сравнению с другими белками – глобулинами, мукопротеинами, гемоглобином и белком Бенс-Джонсона. Это свойство полосок делает их пригодными к обнаружению селективной протеинурии, когда практически весь белок представлен альбумином, но обуславливает получение ложноотрицательных результатов при других видах протеинурии.

Количественные методы определения общего белка в моче включают турбидиметрические и нефелометрические, а также колориметрические .

Турбидиметрические и нефелометрические методы основаны на снижении растворимости белков мочи вследствие образования суспензии взвешенных частиц под воздействием преципитирующих агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния (нефелометрия), либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрия).

Колориметрические методы основаны на специфических реакциях белков с хромогенами, интенсивность образуемой окраски пропорциональна концентрации исследуемого вещества.

При получении повышенных значений белка в моче с использованием качественных или полуколичественных методов для определения тяжести и установления механизма возникновения протеинурии целесообразно не только определить его количественное содержание, но и оценить изменения белкового спектра мочи, используя метод электрофореза или определить концентрацию отдельных белков мочи иммунохимическими методами.

Повышенные значения

• Нарушение гломерулярной фильтрации;
• нарушение тубулярной реабсорбции;
• миеломная болезнь, амилоидоз;
• макроглобулинемия Вальденстрема;
• моноцитарный лейкоз;
• ожоги, внутрисосудистый гемолиз, рабдомиолиз;
• инфекционные процессы, повышенная температура тела;
• острый панкреатит, цирроз, гепатиты;
• системные заболевания;
• злокачественные новообразования или воспаление мочевыводящих путей, половых органов;
• застойная сердечная недостаточность;
• отравление тяжелыми металлами;
• применение аминогликозидов, нефротоксичных препаратов;
• переохлаждение.

Белок в моче: методы определения

Патологическая протеинурия является одним из наиболее важных и постоянных признаков заболеваний почек и мочевых путей. Определение концентрации белка в моче является обязательным и важным элементом исследования мочи. Выявление и количественная оценка протеинурии важна не только в диагностике многих первичных и вторичных заболеваний почек, оценка изменения выраженности протеинурии в динамике несет информацию о течении патологического процесса, об эффективности проводимого лечения. Обнаружение белка в моче даже в следовых количествах должно настораживать в отношении возможного заболевания почек или мочевых путей и требует повторного анализа. Особо следует отметить бессмысленность исследования мочи и, в частности, определения белка мочи без соблюдения всех правил ее сбора .

Все методы определения белка в моче можно разделить на:

Качественные,

Полуколичественные,

Количественные.

Качественные методы

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Условия определения белка в моче на основе реакции коагуляции:

Моча должна иметь кислую реакцию. Мочу щелочной реакции подкисляют несколькими (2 - 3) каплями уксусной кислоты (5 – 10%).

Моча должна быть прозрачной. Помутнение устраняется через бумажный фильтр. Если помутнение не исчезает, добавляют тальк или жженую магнезию (около 1 чайной ложки на 100 мл мочи), взбалтывают и фильтруют.

Качественную пробу следует проводить в двух пробирках, одна из них – контрольная.

Искать помутнение следует на черном фоне в проходящем свете.

К качественным методам определения белка в моче относятся:

кольцевая проба Геллера ,

проба с 15 – 20% сульфосалициловой кислотой ,

проба с кипячением, и другие.

Как показывают многочисленные исследования, ни один из большого числа известных методов качественного определения белка в моче не позволяет получать надежные и воспроизводимые результаты. Несмотря на это, в большинстве КДЛ в России эти методы широко используются в качестве скрининга – в моче с положительной качественной реакцией в дальнейшем проводят количественное определение белка. Из качественных реакций чаще используют пробу Геллера и пробу с сульфосалициловой кислотой, однако пробу с сульфосалициловой кислотой большей частью считают наиболее подходящей для выявления патологической протеинурии. Проба с кипячением в настоящее время практически не используется в связи с ее трудоемкостью и длительностью.

Полуколичественные методы

К полуколичественным методам относятся:

метод Брандберга-Робертса-Стольникова ,

определение белка в моче с помощью диагностических тест-полосок.

В основе метода Брандберга-Робертса-Стольникова лежит кольцевая проба Геллера, поэтому при данном методе наблюдаются те же ошибки, что и при пробе Геллера.

В настоящее время для определения белка в моче все чаще используются диагностические полоски. Для полуколичественного определения белка в моче на полоске в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий в цитратном буфере. О содержании белка в моче судят по интенсивности сине-зеленой окраски, развивающейся после контакта реакционной зоны с мочой. Результат оценивается визуально или с помощью анализаторов мочи. Несмотря на большую популярность и очевидные преимущества методов сухой химии (простота, скорость выполнения анализа) данные методы анализа мочи в целом и определения белка в частности не лишены серьезных недостатков. Одним из них, приводящих к искажению диагностической информации, является большая чувствительность индикатора бромфенолового синего к альбумину по сравнению с другими белками. В связи с этим, тест-полоски в основном приспособлены к обнаружению селективной гломерулярной протеинурии, когда практически весь белок мочи представлен альбумином. При прогрессировании изменений и переходе селективной гломерулярной протеинурии в неселективную (появление в моче глобулинов) результаты определения белка оказываются заниженными по сравнению с истинными значениями. Данный факт не дает возможности использовать данный метод определения белка в моче для оценки состояния почек (гломерулярного фильтра) в динамике. При тубулярной протеинурии результаты определения белка также оказываются заниженными. Определение белка с помощью диагностических полосок не является надежным индикатором низких уровней протеинурии (большинство выпускаемых в настоящее время диагностических полосок не обладают способностью улавливать белок в моче в концентрации ниже, чем 0,15 г/л). Отрицательные результаты определения белка на полосках не исключают присутствия в моче глобулинов, гемоглобина, уромукоида, белка Бенс-Джонса и других парапротеинов.

Хлопья слизи с высоким содержанием гликопротеидов (например, при воспалительных процессах в мочевых путях, пиурии, бактериурии) могут оседать на индикаторной зоне полоски и приводить к ложноположительным результатам. Ложноположительные результаты могут также быть связаны с высокой концентрацией мочевины . Плохое освещение и нарушение цветоощущения может быть причиной неточного результата.

В связи с этим, использование диагностических полосок следует ограничить скринирующими процедурами, а результаты, полученные с их помощью, следует рассматривать лишь как ориентировочные.

Количественные методы

Корректное количественное определение белка в моче в ряде случаев оказывается непростой задачей. Трудности ее решения определяются следующим рядом факторов:

присутствием в моче множества соединений, способных вмешиваться в ход химических реакций;

значительными колебаниями содержания и состава белков мочи при различных заболеваниях, затрудняющими выбор адекватного калибровочного материала.

В клинических лабораториях преимущественно применяются так называемые «рутинные» методы определения белка в моче, однако они далеко не всегда позволяют получать удовлетворительные результаты.

С точки зрения специалиста-аналитика, работающего в лаборатории, метод, предназначенный для количественного определения белка в моче, должен отвечать следующим требованиям:

обладать линейной зависимостью между поглощением образовавшегося в ходе химической реакции комплекса и содержанием белка в пробе в широком диапазоне концентраций, что позволит избежать дополнительных операций при подготовке пробы к исследованию;

должен быть прост, не требовать высокой квалификации исполнителя, выполняться при малом количестве операций;

обладать высокой чувствительностью, аналитической надежностью при использовании небольших объемов исследуемого материала;

быть устойчивым к воздействию различных факторов (колебаниям состава образца, присутствию лекарственных препаратов и др.);

обладать приемлемой стоимостью;

быть легко адаптируемым к автоанализаторам;

результат определения не должен зависеть от белкового состава исследуемого образца мочи.

Ни один из известных к настоящему времени методов количественного определения белка в моче не может в полной мере претендовать на роль «золотого стандарта».

Количественные методы определения белка в моче можно разделить на турбидиметрические и колориметрические.

Турбидиметрические методы

К турбидиметрическим методам относятся:

определение белка с сульфосалициловой кислотой (ССК),

определение белка с трихлоруксусной кислотой (ТХУ),

определение белка с бензетоний хлоридом.

Турбидиметрические методы основаны на снижении растворимости белков мочи вследствие образования суспензии взвешенных частиц под воздействием преципитирующих агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния, определяемого числом светорассеивающих частиц (нефелометрический метод анализа), либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод анализа).

Величина светорассеяния в преципитационных методах обнаружения белка в моче зависит от множества факторов: скорости смешивания реактивов, температуры реакционной смеси, значения pH среды, присутствия посторонних соединений, способов фотометрии. Тщательное соблюдение условий реакции способствует образованию стабильной суспензии с постоянным размером взвешенных частиц и получению относительно воспроизводимых результатов.

Некоторые лекарственные препараты влияют на результаты турбидиметрических методов определения белка в моче, приводя к так называемым «ложноположительным», либо «ложноотрицательным» результатам. К ним относятся некоторые антибиотики (бензилпенициллин, клоксациллин и др.), рентгеноконтрастирующие йодсодержащие вещества, сульфаниламидные препараты.

Турбидиметрические методы плохо поддаются стандартизации, часто приводят к получению ошибочных результатов, но, несмотря на это, в настоящее время они широко используются в лабораториях из-за невысокой стоимости и доступности реактивов. Наиболее широко в России используется метод определения белка с сульфосалициловой кислотой.

Колориметрические методы

Наиболее чувствительными и точными являются колориметрические методы определения общего белка мочи, основанные на специфических цветных реакциях белков.

К ним относятся:

биуретовая реакция,

метод Лоури,

методы, основанные на способности различных красителей образовывать комплексы с белками:

Понсо S (Ponceau S),

Кумасси бриллиантовый синий (Coomassie Brilliant Blue)

пирогаллоловый красный (Pyrogallol Red).

С точки зрения исполнителя, в повседневной работе лаборатории при большом потоке исследований биуретовый метод является неудобным из-за большого числа операций. В то же время, метод характеризуется высокой аналитической надежностью, позволяет определять белок в широком диапазоне концентраций и выявлять альбумин, глобулины и парапротеины со сравнимой чувствительностью, вследствие чего биуретовый метод рассматривают в качестве референтного и рекомендуют для сравнения других аналитических методов обнаружения белка в моче. Биуретовый метод определения белка в моче предпочтительно выполнять в лабораториях, обслуживающих нефрологические отделения, и использовать в тех случаях, когда результаты определения с помощью других методов представляются сомнительными, а также для определения величины суточной потери белка у нефрологических больных.

Метод Лоури, обладающий более высокой чувствительностью по сравнению с биуретовым методом, сочетает биуретовую реакцию и реакцию Фолина на аминокислоты тирозин и триптофан в составе белковой молекулы. Несмотря на высокую чувствительность, данный метод не всегда обеспечивает получение надежных результатов при определении содержания белка в моче. Причиной тому служит неспецифическое взаимодействие реактива Фолина с небелковыми компонентами мочи (чаще всего аминокислотами, мочевой кислотой, углеводами). Отделение этих и других компонентов мочи путем диализа или осаждения белков позволяет с успехом использовать данный метод для количественного определения белка в моче. Некоторые лекарственные препараты – салицилаты, хлорпромазин, тетрациклины способны оказывать влияние на данный метод и извращать результаты исследования.

Достаточная чувствительность, хорошая воспроизводимость и простота определения белка по связыванию красителей делают эти методы перспективными, однако высокая стоимость реактивов препятствует более широкому их использованию в лабораториях. В настоящее время в России все большее распространение получает метод с пирогаллоловым красным.

Проводя исследование уровня протеинурии, нужно иметь ввиду, что различные методы определения протеинурии имеют разную чувствительность и специфичность к многочисленным белкам мочи.

Исходя из эмпирических данных, рекомендуется определять белок двумя разными методами и рассчитывать истинное значение по одной из приведенных формул: протеинурия = 0,4799 B + 0,5230 L; протеинурия = 1,5484 B – 0,4825 S; протеинурия = 0,2167 S + 0,7579 L; протеинурия = 1,0748 P – 0,0986 B; протеинурия = 1,0104 P – 0,0289 S; протеинурия = 0,8959 P + 0,0845 L; где B – результат измерения с Кумасси G-250; L - результат измерения с реактивом Лоури; P - результат измерения с молибдатом пирогаллола; S - результат измерения с сульфосалициловой кислотой.

Учитывая выраженные колебания уровня протеинурии в различное время суток, а также зависимость концентрации белка в моче от диуреза, различное его содержание в отдельных порциях мочи, в настоящее время при патологии почек принято оценивать выраженность протеинурии по суточной потере белка с мочой, то есть определять так называемую суточную протеинурию. Она выражается в г/сут.

При невозможности сбора суточной мочи рекомендуется определять в разовой порции мочи концентрации белка и креатинина. Поскольку скорость выделения креатинина в течение дня достаточно постоянна и не зависит от изменения скорости мочеотделения, отношение концентрации белка к концентрации креатинина постоянно. Данное отношение хорошо коррелирует с суточной экскрецией белка и, следовательно, может использоваться для оценки выраженности протеинурии. В норме отношение белок/креатинин должно быть менее 0,2. Белок и креатинин измеряют в г/л. Важным достоинством метода оценки выраженности протеинурии по соотношению белок-креатинин является полное исключение ошибок, связанных с невозможностью или неполным сбором суточной мочи.

Литература:

О. В. Новоселова, М. Б. Пятигорская, Ю. Е. Михайлов, "Клинические аспекты выявления и оценки протеинурии", Справочник заведующего КДЛ, № 1, январь 2007 г.

А. В. Козлов, "Протеинурия: методы ее выявления", лекция, Санкт-Петербург, СПбМАПО, 2000 г.

В. Л. Эмануэль, «Лабораторная диагностика заболеваний почек. Мочевой синдром», - Справочник заведующего КДЛ, № 12, декабрь 2006 г.

В.И. Пупкова, Л.М. Прасолова - Методы определения белка в моче (обзор литературных данных)

Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. Е. А. Кост. Москва, "Медицина", 197

Когда в моче повышен белковый показатель, такая ситуация вызывает настороженность у взрослого человека. Неудивительно, ведь протеинурия считается маркером проблем с почками. Норма белка в моче – это когда его нет вообще либо определяется незначительное количество протеинов. О чем говорит превышение допустимых отклонений показателей?

Кому и зачем назначают обследование на протеинурию?

Когда может понадобиться анализ на белок в моче? Причин для такого исследования есть несколько. Например, если врач обнаружит у пациента такие симптомы нефропатии, как отек ног, набор веса, уменьшение количества урины, повышенную утомляемость, гипертонию, анализ на содержание белка в моче поможет подтвердить диагноз. Обследоваться периодически необходимо людям, которые входят в категорию риска развития хронической дисфункции почек. Контроль белка в моче позволяет вовремя обнаружить ХПН. К факторам риска относится наследственность, пожилой возраст, курение, ожирение, болезни почек. При сахарном диабете, а также иных системных болезнях (волчанке, амилоидозе), которые негативно влияют на почки, также периодически проводят анализ на наличие белка в моче. По нему можно оценить степень поражения органа.

Необходимо такое исследование, когда для лечения каких-то заболеваний назначают нефротоксические препараты. Анализ на повышенный белок в моче помогает понять, насколько почки нормально функционируют. Многие препараты, в том числе и обычный аспирин с пенициллином, способны повредить почки. Если после назначения лекарств обнаруживают белок в анализе мочи, следует скорректировать терапию. Данный анализ помогает диагностировать первичные гломерулопатии, липоидный нефроз, мембранозный гломерулонефрит и схожие патологии, провоцирующие повышенное содержание белков в моче.

Исследование биоматериала на протеины

Методы определения белка в моче подразделяют на качественные, количественные, полуколичественные. Качественные применяют для скрининга, так как их результаты не особо надежные. Основаны такие методики на свойствах протеинов к денатурации при химических и физических воздействиях. Во время качественного определения белка в моче образец должен быть прозрачным, иначе присутствие белкового осадка сложно будет различить. Если образец мутный, в него добавляют тальк либо магнезию и фильтруют. Наиболее распространенные качественные анализы – методика Геллера, реакция с сульфосалициловой кислотой.

Полуколичественным является унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова и экспресс-методы. Удобны они тем, что позволяют легко определить высокое содержание протеинов в моче в домашних условиях. Образец собирается по правилам, затем в него опускают специальные тест-полоски. Проверяется либо суточная моча на белок, либо разовая порция. Оценивают результат по цветовой шкале или с помощью анализатора.

Количественное определение белка в моче предпочтительнее, но требуют соблюдения множества специфических условий. Поэтому и такие пробы нередко дают ложные результаты. Наиболее точными считаются колориметрические пробы, которые базируются на цветовых реакциях белковых структур. Это биуретовый метод, тест Лоури, метод ПКГ (реакция с пирогаллоловым красным). Практически все количественные пробы для определения белка в моче чувствительны только к альбуминам. Наличие глобулинов, мукопротеинов либо структур Бенс-Джонса такое исследование не покажет. Поэтому если анализ на общий белок в моче отрицательный, но врач подозревает патологию, назначают дополнительные диагностические процедуры. Для выявления разных типов протеинов используют иммунохимические исследования и эректрофорез.

Несмотря на то, что и общий анализ мочи (ОАМ), проведенный по разовой утренней порции может показать наличие протеинов, для обнаружения патологии почек рекомендуется исследовать суточный белок в моче. Связано это с тем, что в течение дня выделение протеинов колеблется, и диурез влияет на их концентрацию. Если нет возможности сдать суточный анализ мочи на белок, рекомендуется провести расчет в разовой порции соотношения протеина с креатинином, поскольку он постоянно выделяется с одинаковой скоростью. Преимущество такой диагностики еще и в том, что исключаются ошибки, связанные со сложностями самостоятельно правильно собрать суточную мочу.

Расшифровка результатов

Если при проведении исследования обнаружен белок в моче, что это значит? О чем говорят различные показатели? Хотя именно отсутствие белка в моче считается нормой (в бланке отмечается обозначением abs), небольшое его содержание – это не повод бить тревогу. Необходимо смотреть на клиническую картину в целом.

Референсные значения при исследовании разовой утренней порции – до 0,15 г/л. При оценке суточной протеинурии в состоянии покоя пациента показатель не должен превышать 0,14 г/сут. Если имела место повышенная физическая нагрузка, то допустимой считается концентрация до 0,3 г/сут.

Превышение данных показателей классифицируется, как протеинурия (альбуминурия). При измерении суточной экскреции по степени выраженности различается:

• Физиологическое превышение или следы белка в моче – до 300 мг/сут.
• Низкая суточная потеря белка – до 500 мг/сут.
• Протеинурия умеренная – до 3 г/сут.
• Выраженная экскреция протеинов – более 3 г/сут.

Мизерный объем белка в общем анализе мочи не всегда определяется, поэтому при жалобах пациента и характерных симптомах рекомендуется более тщательная диагностика. Для соотношения белок-креатинин в моче нормой считается показатель 0,2. Полное отсутствие либо крайне низкий уровень белка в моче не несет диагностического значения.

Почему в анализе может появляться протеин?

Содержание белковых структур в мочевой жидкости зависит от всасывания почечных канальцев, особенностей кровообращения и состояния гломерулярной фильтрационной системы. Причины протеинурии связаны с нарушением этих механизмов, чаще это происходит под влиянием физиологических факторов и лишь в 2% всех случаев выявления протеинов причиной являются заболевания почек или другие серьезные патологии. Именно снижение способности парного органа к нормальной фильтрации приводит к превышающей норму экскреции белковых элементов в мочевыводящие пути. Появляется белок в моче при следующих проблемах с почками:

• липоидном нефрозе, гломерулонефритах, синдроме Фанкони, при пиелонефрите, гломерулярном склерозе, иных первичных почечных патологиях;
• повреждении почек при гипертензии, преэклампсии, злокачественных опухолях, сахарном диабете, системных патологиях соединительной ткани, пр.;
• нарушении функции почек из-за отравления свинцом или ртутью;
• камнях в почках;
• почечной карциноме – раке органа;
• поражении почечной тканей при нефротоксичной терапии;
• воспалении почек из-за простуды, вызванной сидением на холодной поверхности.

Почему белок в моче может появиться, когда нет проблем с почками? Протеинурия может быть связана с гиперфункцией щитовидной железы, мочекаменной болезнью, сердечной патологией, различными травмами, инфекциями выделительной системы. Экскреция белка с мочой возможна при поражении ЦНС, запущенной пневмонии, гастрите, гестозе у беременных, туберкулезе у пожилых людей.

Протеинурия иногда возникает из-за увеличенного образования белковых структур в организме. Превышение концентрации протеинов вызывает миеломная болезнь, повреждение мышц, гемоглобинурия, макроглобулинемия. Причины появления белка в моче могут быть вполне безобидными. Такую протеинурию называют физиологичной или временной, потому что она проходит без лечения. Например, при сильной нагрузке у спортсменов может быть обнаружено много белка в биоматериале (маршевая протеинурия). Транзиторное увеличение показателей случается при фимозе у мальчиков, аллергии, переохлаждении, глистах, после операции в области брюшной полости, а также после гриппа либо ОРВИ. Положительная реакция на белок в моче проявляется после сильного стресса, при лихорадочных состояниях, обезвоживании, протеиновой диете, длительном голодании.

Диагностика

Различают виды протеинурии по патогенезу (механизмам образования), времени появления, степени выраженности, локализации источника патологии. Все они описаны в Международной классификации болезней. Повышение белка в мочевой жидкости имеет код МКБ-10 R80. По месту развития патологических процессов выделяется:

• Протеинурия преренальная – распад белковых структур усиленно протекает в тканях либо активно разрушаются эритроциты, секретируя большое количество гемоглобина.
• Протеинурия ренальная – патология наблюдается в почечных канальцах и клубочках. Если поврежден именно гломерулярный фильтр – это протеинурия клубочковая. При неспособности канальцевой системы почек реабсорбировать альбумины из плазмы крови говорят о протеинурии тубулярной.
• Протеинурия постренальная – диагностируется при болезнях нижних отделов мочевыделительной системы (мочевого пузыря, уретры, половых органов, мочеточника).

Дифференциальная диагностика протеинурии между тубулярной и клубочковой формами проводится на основании количества обнаруженного белка, а также сопутствующих симптомов. При поражении клубочков часто наблюдается выраженная протеинурия, которая сопровождается отеками тканей. При патологии канальцев экскреция альбуминов не так выражена. Для уточнения диагноза смотрят и на такие параметры урины, как лейкоциты, эритроциты, бактерии, слизь, сахар, нитриты.

По тому, какие именно белковые структуры проникают в мочу, протеинурия бывает селективной, когда выделяются в биоматериал исключительно альбумины и другие микропротеины. При протеинурии неселективной в образце, кроме низкомолекулярных, появляются структуры со средней и высокой молекулярной массой (глобулины, липопротеиды).

Чтобы диагностика была достоверной, важно соблюдать правила сбора образца и подготовки к анализу, зависят они от назначенного метода исследования.

Люди часто интересуются, что нельзя есть перед сдачей мочи? На самом деле, особых ограничений по продуктам нет, разве что не рекомендуется обильное белковое питание. В течение суток перед тем, как собирать биоматериал, нельзя употреблять алкоголь. На результаты также влияет прием некоторых препаратов (антибиотиков, аспирина) и неправильно собранный биоматериал. Мочегонные средства нельзя использовать в течение 2-х дней перед анализом.

Сама по себе протеинурия не дает оснований для постановки диагноза, чтобы уточнить причины выделения белка с мочой, необходимы дополнительные анализы, инструментальная диагностика и сбор анамнеза.

Симптомы и риски протеинурии

Дефицит различных протеинов в организме может не ощущаться, если их потеря невелика. Когда же обнаружено белка в моче достаточно много, этот процесс сопровождается характерными симптомами протеинурии:

• отеками тканей, особенно в области нижних конечностей и лица;
• снижением онкотического кровяного давления;
• асцитом – скоплением жидкости в брюшной полости;
• слабостью в мышцах, ощущением ломоты в костях;
• сонливостью, головокружением;
• тошнотой, ухудшением аппетита;
• неприятным запахом урины (в случае опухоли мочевого пузыря, например, моча пахнет тухлым мясом).

Каждое состояние, при котором в мочевой жидкости повышен белок, имеет специфические признаки. Например, для диабета характерно повышенное давление, жажда, частое мочеиспускание. При гестозе нередко повышенное количество белка в моче сочетается с низким уровнем гемоглобина.

Чем опасен избыток экскреции в мочу белка? При большой потере различных видов протеинов могут проявиться достаточно тяжелые осложнения. К таковым относится повышение свертываемости крови, тромбоз, снижение сопротивляемости к инфекциям, атеросклероз, плохое заживление ран, снижение функции щитовидной железы, аномальное повышение липидов и нехватка кальция в крови, пр.

Что делать, если белковые показатели выше нормы?

Как уменьшить белок в моче? Это закономерный вопрос для тех, кто столкнулся с такой проблемой. Важно понимать, что выбор лечебных мероприятий зависит от того, что является первопричиной высокого белка. Если всему виной почечная патология или другое серьезное заболевание, лечить пациента должны профессионалы. Никакими народными средствами в таких ситуациях увлекаться не стоит без консультации с врачом. Из препаратов, снижающих уровень протеинов, применяют цитостатики, кортикостероиды, антиагреганты, антибактериальные таблетки в случае инфекции. Для лечения протеинурии у детей и беременных используют более безопасные препараты, например, канефрон на травах. Если появление белка в моче временное, лечение специальное не требуется.

Как избавиться от белка в моче, если причины не патологические? В первую очередь следует подумать не о препаратах, а о диете, которая способна понизить нагрузку на почки. Полезно будет убрать из рациона тяжелые белковые продукты животного происхождения, лучше кушать растительные протеины. Снизить белок в моче помогут проверенные народные рецепты. Хорошие белково- выводящие свойства показывает клюква. Из ягоды можно делать морсы или кашицы. Настои из петрушки, березовых почек, липы с лимоном также способны оказать благоприятное воздействие на почки и вывести белок из мочи. Применяют в этих целях и продукты пчеловодства.

Важно осознать, что эффективность лечения напрямую зависит от своевременной диагностики, поэтому врачи рекомендуют хотя бы раз в год сдавать анализ мочи на протеины в качестве профилактики.

26.02.2009

Куриляк О.А., к.б.н.

В норме белок выделяется с мочой в относительно небольшом количестве, обычно не более 100-150 мг/сут.

Суточный диурез у здорового человека составляет 1000-1500 мл/сут; таким образом, концентрация белка в физиологических условиях составляет 8-10 мг/дл (0,08-0,1 г/л).

Общий белок мочи представлен тремя основными фракциями - альбуминами, мукопротеинами и глобулинами.

Альбумин мочи - это та часть альбумина сыворотки крови, которая была профильтрована в клубочках и не была реабсорбирована в почечных канальцах; в норме экскреция альбумина в моче составляет менее 30 мг/сут. Иным главным источником белка в моче служат почечные канальцы, особенно дистальная часть канальцев. Эти канальцы секретируют две третьих общего количества мочевого белка; из этого количества примерно 50% представлено гликопротеидом Тамма‑Хорсфалла, который секретируется эпителием дистальных канальцев и играет важную роль в формировании мочевых камней. Иные белки присутствуют в моче в незначительном количестве и происходят из профильтровавшихся через почечный фильтр низкомолекулярных белков плазмы, которые не реабсорбируются в почечных канальцах, микроглобулинов из эпителия почечных канальцев (RTE), а также простатического и влагалищного отделяемого.

Протеинурия, то есть увеличение содержания белка в моче - один из наиболее значимых симптомов, отражающий поражение почек. Однако и целый ряд других состояний также может сопровождаться протеинурией. Поэтому различают две основные группы протеинурий: почечную (истинную) и внепочечную (ложную) протеинурию.

При почечной протеинурии белок проникает в мочу непосредственно из крови вследствие повышения проницаемости гломерулярного фильтра. Почечная протеинурия часто встречается при гломерулонефрите, нефрозе, пиелонефрите, нефросклерозе, амилоидозе почек, различных формах нефропатий, например нефропатии беременных, лихорадочных состояниях, гипертонической болезни и т.д. Протеинурия может обнаруживаться и у здоровых людей после тяжелых физических нагрузок, переохлаждения, психологического стресса. У новорожденных в первые недели жизни наблюдается физиологическая протеинурия, а при астении у детей и подростков в сочетании с быстрым ростом в возрасте 7-18 лет возможна ортостатическая протеинурия (в вертикальном положении тела).

При ложной (внепочечной) протеинурии источником белка в моче является примесь лейкоцитов, эритроцитов, клеток эпителия мочевых путей уротелия. Распад этих элементов, особенно резко выраженный при щелочной реакции мочи, приводит к попаданию белка в мочу, уже прошедшую почечный фильтр. Особенно высокую степень ложной протеинурии дает примесь крови в моче, при профузной гематурии она может достигать 30 г/л и более. Заболевания, которые могут сопровождаться внепочечной протеинурией - мочекаменная болезнь, туберкулез почки, опухоли почки или мочевых путей, циститы, пиелиты, простатиты, уретриты, вульвовагиниты.

Клиническая классификация включает легкую протеинурию (менее 0,5 г/сут.), умеренную (от 0,5 до 4 г/сут.), или тяжелую (более 4 г/сут.).

У большинства пациентов с заболеваниями почек, такими, как острый гломерулонефрит или пиелонефрит выявляют умеренную протеинурию, но больные с нефротическим синдромом обычно выделяют с мочой более 4 г белка ежедневно.

Для количественного определения белка применяется широкий спектр методов, в частности, унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова, биуретовый метод, метод с применением сульфосалициловой кислоты, методы с использованием красителя кумасси синий, красителя пирогаллоловый красный и др.

Использование различных методов определения белка в моче привело к тому, что в трактовке границ нормы содержания белка в моче возникла серьезная путаница. Поскольку наиболее часто в лабораториях используются 2 метода - с сульфосалициловой кислотой и красителем пирогаллоловый красный, рассмотрим проблему корректности границ норм именно для них. С позиции сульфосалицилового метода в нормальной моче содержание белка не должно превышать 0,03 г/л, с позиции же пирогаллолового - 0,1 г/л! Различия троекратные!!!

Низкие значения нормы концентрации белков в моче при использовании сульфосалицилового обусловлены следующими моментами:

• калибровочная кривая строится по водному раствору альбумина. Моча по своему составу очень сильно отличается от воды: рН, соли, низкомолекулярные соединения (креатинин, мочевина и др). Вследствие этого по данным Альтшулера, Ракова и Ткачева ошибка определения белка в моче может быть 3-х кратной и более! Т.е. корректные результаты определения могут быть получены только в тех случаях, когда моча имеет очень низкий удельный вес и по своему составу и рН приближается к воде;
• более высокая чувствительность сульфосалицилового метода к альбумину в сравнении с другими белками (в то время, как было упомянуто выше, альбумин в нормальных образцах мочи составляет не более 30% от общего белка мочи);
• если pH мочи сдвинута в щелочную сторону, происходит нейтрализация сульфосалициловой кислоты, что так же является причиной занижения результатов определения белка;
• скорость седиментации преципитатов подвержена значительной вариации - при невысоких концентрациях белка преципитация замедлена, и ранняя остановка реакции приводит к занижению результата;
• скорость реакции преципитации существенно зависит от перемешивания реакционной смеси. При высоких концентрациях белка активное встряхивание пробирки может приводить к образованию крупных хлопьев и их быстрому осаждению.

Все выше перечисленные особенности метода и приводят к значительному занижению определяемой в моче концентрации белка. При этом степень занижения сильно зависит от состава конкретной пробы мочи. Поскольку метод сульфосалициловой кислоты дает заниженные значения концентрации белка то и граница нормы для этого метода 0,03 г/л тоже занижена примерно в три раза в сравнении с данными, которые приводятся в зарубежных справочниках по клинической лабораторной диагностике.

Подавляющее большинство лабораторий западных стран отказались от применения сульфосалицилового метода для определения концентрации белка в моче и активно используют для этих целей пирогаллоловый метод. Пирогаллоловый метод определения концентрации белка в моче и других биологических жидкостях основан на фотометрическом принципе измерения оптической плотности окрашенного комплекса, образующегося при взаимодействии молекул белка с молекулами комплекса красителя пирогаллоловый красный и молибдата натрия (Pyrogallol Red-Molybdate complex).

Почему пирогаллоловый метод позволяет получать более точные результаты измерения концентрации белка в моче? Во-первых, за счет большей кратности разведения пробы мочи в реакционной смеси. Если в сульфосалициловом методе отношение проба мочи/реагент составляет 1/3, то в пирогаллоловом методе оно может быть в пределах от 1/12,5 до 1/60 в зависимости от варианта методики, что значительно уменьшает влияние состава мочи на результат измерения. Во-вторых, реакция протекает в сукцинатном буфере, то есть при стабильном рН. И, наконец, сам принцип метода, можно сказать, более «прозрачный». Молибдат натрия и краситель пирогаллоловый красный образуют комплекс с молекулой белка. Это приводит к тому, что молекулы красителя в свободном состоянии не поглощающие свет на длине волны 600 нм в комплексе с белком свет поглощают. Таким образом, мы как бы метим каждую молекулу белка красителем и в результате получаем, что изменение оптической плотности реакционной смеси на длине волны 600 нм четко коррелирует с концентрацией белка в моче. Причем, поскольку сродство пирогаллолового красного к разным фракциям белка практически одинаковое, метод позволяет определять общий белок мочи. Поэтому граница нормальных значений концентрации белка в моче составляет 0,1 г/л (она и указана во всех современных западных руководствах по клинико-лабораторной диагностике, в том числе и в «Клиническом руководстве по лабораторным тестам», под ред. Н. Тица). Сравнительные характеристики пирогаллолового и сульфосалицилового методов определения белка в моче представлены в Таблице 1.

В заключение, хотелось бы еще раз акцентировать внимание на том факте, что при переходе лаборатории с сульфосалицилового метода определения белка в моче на пирогаллоловый метод граница нормальных значений существенно повышается (с 0,03 г/л до 0,1г/л!). Об этом сотрудники лаборатории должны непременно поставить в известность врачей-клиницистов, т.к. при сложившейся ситуации диагноз протеинурия может быть поставлен только в том случае, когда содержание белка в моче превышает 0,1 г/л.

Список литературы.

1. Альтшулер Б.Ю., Раков С.С., Ткачев Г.А. // Вопр. мед. химии. - 2001. - № 4. - C.426-438.
2. Ким Ю.В., Потехин О.Е., Токар М.И., Шибанов А.Н. // Лаб. мед. - 2003. - № 6. - C.94-98.
3. Клиническое руководство по лабораторным тестам, под ред. Н. Тица.- М.- Юнимед-пресс.-2003.- 942 с.
4. Козлов А.В., Слепышева В.В. Методы определения белка в моче: возможности и перспективы // Сборник трудов VII ежегод. СПб нефрол. семинара. - СПб: ТНА. - 1999. - C.17-28.
5. Пупкова В.И., Пикалов И.В., Хрыкина Е.Н., Харьковский А.В. // Новости «Вектор-Бест». - 2003. - № 4 (30).
6. Chambers R.E., Bullock D.G., Whicher J.T. // Ann. Clin. Biochem. - 1991. - Vol. 28 (Pt 5). - P.467-473.
7. Clinical Laboratury Medicine. Ed. by Kenneth D. McClatchey. - 2nd ed.-2001.- 1993p.
8. Eppel G.A., Nagy S., Jenkins M.A., Tudball R.N., Daskalakis M., Balazs N.D.H., Comper W.D. // Clin. Biochem. - 2000. - Vol. 33. - P.487-494.
9. Franke G., Salvati M., Sommer R.G. Composition and device for urinary protein assay and method of using the same // ПатентСША № 5326707. - 1994.
10. Kaplan I.V., Levinson S.S. // Clin. Chem. - 1999. - Vol. 45. - P.417-419.
11. Kashif W., Siddiqi N., Dincer H.E., Dincer A.P., Hirsch S. // Cleveland Clin. J. of Med. - 2003. - Vol. 70 (6). - P.535-547.
12. Koerbin G, Taylor L, Dutton J, Marshall K, Low P, Potter JM. // Clin. Chem. - 2001. - Vol. 47. - P.2183-2184.
13. Le Bricon T., Erlich D., Dussaucy M., Garnier J.P., Bousquet B. // Article in French. - Ann. Biol. Clin. (Paris). - 1998. - Vol. 56 (6). - P.719-723.
14. Marshall T., Williams K.M. // Clin. Chem. - 2003. - Vol. 49 (12). - P.2111-2112.
15. Pugia M., Newman D.J., Lott J.A., D’Mello L., Clark L., Profitt J.A., Cast T. // Clin. Chim. Acta. - 2002. - Vol. 326 (1-2). - P.177-183.
16. Ringsrud K.M., Linne J.J. Urinalysis and body fluids: A ColorText and Atlas // Mosby. - 1995. - P.52-54.
17. Shepard M.D., Penberthy L.A. // Clin. Chem. - 1987. - Vol. 33. - P.792-795.
18. Williams K.M., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. Methods. - 2001. - Vol. 47. - P.197-207.
19. Williams K.M., Arthur S.J., Burrell G., Kelly F., Phillips D.W., Marshall T. // J. Biochem. Biophys. Methods. - 2003. - Vol. 57 (1). - P.45-55.